日韩欧美亚洲国产精品字幕久久久,大香蕉最新视频在线观看,一二三久久久久久久久久久,青青草免费高清在线视频

產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

首頁 > 技術(shù)與支持 > PCR實驗室被污染處理探究
PCR實驗室被污染處理探究
點擊次數(shù):213 更新時間:2025-04-08

    有實驗室的地方,就不可避免的會出現(xiàn)實驗室污染。實驗室的污染,不僅會影響實驗與科研的質(zhì)量和效果,還對實驗室工作人員的身體健康有損害,現(xiàn)在來一起了解下PCR實驗室的污染原因及解決方法。             

PCR實驗室污染分類:

標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染,或標本放置時,由于密封不嚴溢于容器外,或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中,由于吸樣槍污染導致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散,導致彼此間的污染。

PCR試劑的污染:主要是由于在PCR試劑配制過程中,由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。

PCR擴增產(chǎn)物污染:這是PCR反應(yīng)中主要-常見的污染問題。因為PCR產(chǎn)物拷貝量大,遠遠高于PCR檢測數(shù)個拷貝的極限,所以極微量的PCR產(chǎn)物污染,就可造成假陽就可形成假陽性。

還有一種容易忽視,可能造成PCR產(chǎn)物污染的形式是氣溶膠污染;在空氣與液體面摩擦時就可形成氣溶膠,在操作時比較劇烈地搖動反應(yīng)管,開蓋時、吸樣時及污染進樣槍的反復吸樣都可形成氣溶膠而污染。

實驗室中克隆質(zhì)粒的污染:在分子生物學實驗室及某些用克隆質(zhì)粒做陽性對照的檢驗室,這個問題也比較常見,因為克隆質(zhì)粒在單位容積內(nèi)含量相當高,另外在純化過程中需用較多的用具及試劑,而且在活細胞內(nèi)的質(zhì)粒,由于活細胞的生長繁殖的簡便性及具有很強的生命力,其污染可能性也很大。

、 污染監(jiān)測

一個好的實驗室,要時刻注意污染的監(jiān)測,考慮有無污染是什么原因造成的污染,以便采取措施,防止和消除污染。

對照試驗:

1、陽性對照:在建立PCR反應(yīng)實驗室及一般的檢驗單位都應(yīng)設(shè)有PCR陽性對照,它是PCR 反應(yīng)是否成功、產(chǎn)物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個重要的參考標志。

2、陰性對照:每次PCR實驗務(wù)必做陰性對照。它包括①標本對照:被檢的標本是血清就用鑒定后的正常血清作對照;被檢的標本是組織細胞就用相應(yīng)的組織細胞作對照。②試劑對照:在PCR試劑中不加模板DNARNA,進行PCR擴增,以監(jiān)測試劑是否污染。

3、重復性試驗。

4、選擇不同區(qū)域的引物進行PCR擴增。

 

、防止污染的方法

進行PCR操作時,操作人員應(yīng)該嚴格遵守一些操作規(guī)程,-大程度地降低可能出現(xiàn)的PCR污染或杜絕污染的出現(xiàn)。

劃分操作區(qū):目前,普通PCR尚不能做到單人單管,實現(xiàn)全閉管操作,但無論是否能夠達到單人單管,均要求實驗操作在三個不同的區(qū)域內(nèi)進行,PCR的前處理和后處理要在不同的隔離區(qū)內(nèi)進行:

試劑準備區(qū)。

標本制備區(qū)。

PCR擴增區(qū)及分析區(qū)。

切記:任何一間的產(chǎn)物及器材不要拿到其他兩個工作區(qū)。

分裝試劑:PCR擴增所需要的試劑均應(yīng)在生物安全柜、裝有紫外燈的超凈工作臺或負壓工作臺配制和分裝。所有的加樣器和吸頭需固定放于其中,不能用來吸取擴增后的DNA和其他來源的DNA

PCR用水應(yīng)為高壓的雙蒸水;

引物和dNTP用高壓的雙蒸水在無PCR擴增產(chǎn)物區(qū)配制;

引物和dNTP應(yīng)分裝儲存,分裝時應(yīng)標明時間,以備發(fā)生污染時查找原因。

、PCR實驗操作注意事項:

盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應(yīng)的原因,樣品間的交叉污染也是原因之一。因此,不僅要在進行擴增反應(yīng)是謹慎認真,在樣品的收集、抽提和擴增的所有環(huán)節(jié)都應(yīng)該注意:

1. 戴一次性手套,若不小心濺上反應(yīng)液,立即更換手套;

2. 使用一次性吸頭,嚴禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用,吸頭不要長時間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染;

3. 避免反應(yīng)液飛濺,打開反應(yīng)管時為避免此種情況,開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上,應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;

4. 操作多份樣品時,制備反應(yīng)混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后分裝,這樣即可以減少操作,避免污染,又可以增加反應(yīng)的精-確度;

5. 后加入反應(yīng)模板,加入后蓋緊反應(yīng)管;

6. 操作時設(shè)立陰陽性對照和空白對照,即可驗證PCR反應(yīng)的可靠性,又可以協(xié)助判斷擴增系統(tǒng)的可信性;

7. 盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由于加樣器容易受產(chǎn)物氣溶膠或標本DNA的污染,-好使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器,至少PCR操作過程中加樣器應(yīng)該,不能交叉使用,尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區(qū);

8. 重復實驗,驗證結(jié)果,慎下結(jié)論。


97超碰碰国产精品乱码| 大鸡巴抄逼欧美| A片人人澡C片人人人妻| 嗯啊好大好粗日我我视频| 久久被窝亚洲精品爽爽爽| 免费无码A片一区二三区| 国产高清视频在线观看不卡| 欧美a级爱爱成年人视频| 性色在线播放免费人成片| 韩国三级电影女人的战争| 国产麻豆一精品一av一免费| 一区二区三区成人色影院| 一二三四社区在线高清3| 成人免费无码成人影院日韩| 九九在线视频这里只有精品| 国产九九99九九99九九| 国产精品欧美一区二区三区| 被多个强壮的黑人灌满精| 澳门永久av免费网站入口| 精品无码黑人又粗又大又长| 欧美视频日韩视频在线视频| 久久久久久久久久久本色| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲avav天堂青青草原| 国产精品久久久久久438| 大炕上大战白胖老妇| 男女猛烈无遮挡免费视频| 自拍不卡dvd在线一区| 久久久爽爽爽夜夜夜精品| 久久久久久一区国产一区| 牛仔裤美女国产精品毛片| 十八禁视频野外| 亚洲一区二区三区高清网| 男插女免费视频毛片经典| 国产成人精品性色av麻豆| 国产精品久久久久久久人热| 精品久久久久久人妻av热| 麻豆国产精品香甜甜七夕| 久久精品av国产一区二区| 99久久国产福利自产拍| 久久久久久久久久久后入|